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  siRNA轉染試劑說明書

貨號：YJ0871

保存：2-8℃

組分說明

   Catalog no.                YJ0871           YJ0871A

   Kit Size                  0.5 ml             1 ml

siRNA Transfection Reagent         0.5 ml           1 ml

產(chǎn)品簡介

         siRNAFect 是一種的陽離子脂質(zhì)體轉染試劑。適用于多種細胞的 siRNA  轉染，其原理為帶正電的脂質(zhì)體通過靜電作用結合到 RNA  的磷酸骨架上形成轉染復合物，將轉染復合物加到細胞上可以與帶負電的細胞膜表面結合即可通過胞吞作用將 siRNA 導入細胞中。主要應用于 RNAi  研究，基因表達和基因功能研究等。

注意事項

 1.  轉染試劑使用前請先震蕩搖勻。

 2.  轉染效率與細胞密度有很大關系，不同實驗間應應保持一個基本的傳代步驟，且應確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。一般貼壁細胞轉染的*細胞密度是70-90%，懸浮細胞的*細胞密度為2-4x106 細胞/ml，用于轉染的*細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或用途而異。  

使用方法

    以下操作步驟以12孔板為例，其他孔板按照表1中所列用量進行實驗。

  1.  在12孔板的每孔中加入1  ml正常生長培養(yǎng)基（根據(jù)需要可加入適量的血清），接種1-3x10  細胞。在37℃條件下培養(yǎng)細胞濃度至70-90%。根據(jù)細胞類型的不同，這一過程通常需要18-24小時不等。由于轉染效率培養(yǎng)條件及其敏感，所以應在不同的實驗間建立一個標準的傳代流程。

  2.  將20 pmol iRNA溶于終體積為50 μl的無血清，無抗生素的培養(yǎng)基中，渦旋5秒或者用槍盡量吹打均勻。

  3.  將2.6  μl轉染試劑稀釋到終體積為50 μl的無血清，無抗生素的培養(yǎng)基中，渦旋10秒。

      注意：溶解過程中可能會出現(xiàn)白色混濁，但不影響轉染效率。

  4． 將稀釋好的轉染試劑加入到核酸溶液中（注意順序一定不能顛倒），渦旋1秒，室溫孵育15分鐘，使轉染試劑與核酸形成穩(wěn)定的復合物（此步驟盡量不要超過20分鐘，否則會影響轉染效率）。

  5.  向穩(wěn)定復合物中加入900  μl帶血清的培養(yǎng)基，用槍輕輕吹打均勻。

  6.  吸去培養(yǎng)板中原有的培養(yǎng)基，加入步驟5中混合好的培養(yǎng)基。在37℃條件下培養(yǎng)細胞24-72小時。

  7.  根據(jù)細胞類型和啟動子活性不同，在轉染后24-72小時分析細胞抽提物，檢測報告基因活性。

  8.  對于穩(wěn)定表達的細胞系，在轉染72小時后，按1：10的比例在細胞中加入選擇培養(yǎng)基對已轉染的報告基因進行篩選。

                                表1：  對不同大小的細胞培養(yǎng)皿，試劑的用量

培養(yǎng)板   每孔表面積  鋪板培養(yǎng)基體積  siRNA和稀釋終體積（μl）siRNA轉染試劑體積

96孔         0.3        100  μl        3 pmol至10  μl     0.4  μl至10 μl

24孔          2         500  μl        10 pmol至20  μl       1.3  μl至20 μl

 12孔          4        1 ml           20 pmol至50  μl      2.6  μl至50 μl

35 mm        10         2 ml          50 pmol至100  μl       6.6  μl至100 μl

 6孔         10         2 ml          50 pmol至100  μl     6.6  μl至100 μl

  60 mm       20        5 ml     100 pmol至200  μl       13.3 μl至200 μl

 10 cm        60        15 ml      300 pmol至500  μl       40 μl至500 μl