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酶聯(lián)免疫吸附試驗

       ①直接法    該方法直接利用抗原 與酶聯(lián)抗體的結(jié)合，較簡單易行。A.假抗原。在聚苯乙烯酶標版的孔穴中加入待檢測的抗原（捕食者胃內(nèi)含物抽提液）0.2mL，在4℃冰箱中過夜，使抗原黏附于塑料孔壁上。B.洗滌兩次，倒置于干毛巾上，使孔穴中的液體盡量流出。c.加酶聯(lián)抗體。 各孔穴中加入酶聯(lián)抗體0.2mL，在mL37℃下孵育3h，使其充分結(jié)合。d. 加底物。 用PBS充分洗滌以除去未結(jié)合的酶聯(lián)抗體，然后加入底物（鄰苯二胺）0.2 mL，于37℃反應(yīng)30min，用2mol/L硫酸0.05 mL終止反應(yīng)。e. 用ELISA檢測儀測定其吸光度值，分別設(shè)陽性、陰性和空白對照，以確定陽性反應(yīng)臨界值。

        ②雙抗體夾心法   該方法與直接法的不同在于吸附抗體。a. 包被抗體。酶標板的孔穴中加入0.2 mL抗體（用PH=9.6/0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋），置37℃水浴中孵育3h,移入4℃冰箱過夜。將各孔中多余的抗體傾去，加入PBS洗滌，立即甩去，再將PBS加滿各板孔，置5min,甩去溶液，如此洗滌2次，倒置于干毛巾上，使孔穴中的液體盡量流出。b. 加待檢抗原。沒孔中加入待檢捕食者胃內(nèi)含物抽提液0.2 mL.同時設(shè)陽性、陰性和空白（PBS）對照，37℃水溶中孵育3h，轉(zhuǎn)入冰箱中過夜。如上法洗滌3次。C. 加入酶聯(lián)抗體。每孔加入酶聯(lián)抗體0.2 mL，37℃水浴孵育2h，如上法洗滌3次。d. 加底物。 每孔加入底物鄰苯二胺0.2 mL, 37℃水浴孵育1h,加入2mol/L硫酸0.05，以終止反應(yīng)。e. 用 ELISA檢測儀測定其吸光度值。

       ③間接法  與前兩種方法不同點在于酶聯(lián)抗體與抗原的間接結(jié)合。a. 每孔加入待檢抗原0.2 mL ，4℃冰箱中過夜，使抗原黏附于塑料孔壁上。并依上法洗滌3次。b. 每孔加0.2 mL,用PBS稀釋的抗體，37℃孵育2-3h。c.用PBS洗滌3次后，加入溶于PBS的酶聯(lián)抗體0.2mL，37℃孵育2-3h。d. 加底物，方法同上。e. 用ELISA檢測

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